本文标题:细胞免疫染色法，了解细胞内胞器的分布情形

信息分类:技术资讯　新闻来源：未知 发布时间：2012-9-12 0:14:43

实验结果

一、 利用细胞免疫染色法，了解细胞内胞器的分布情形。

我们使用Hochest 33258此种萤光物质与DNA结合发出蓝色萤光，可以指示细胞核所在的位置。接着加入会辨识Golgin-245（一种已知会位于哺乳动物细胞内高基氏体的蛋白质）的抗体，以及具有绿色萤光物质标定的二级抗体进行免疫染色作用。我们观察到细胞中有绿色萤光讯息的区域，得知高基氏体这种胞器所在的位置。

二、CTB-594 nm的内胞作用。

为了观察细胞的内胞作用，我们以会激发出红光的CTB-594 nm分子（一种会被细胞经内胞作用而运送至高基氏体的毒蛋白质）与活细胞作用30分钟后，发现CTB-594 nm (红光) 会与标示高基氏体的Golgin-245 (绿光) 讯号重叠，表示CTB-594 nm分子的确会被运送至高基氏体，由此可以得知内胞作用的存在。

三、Tf-488 nm的内胞作用。

为了观察细胞的内胞作用，我们以会激发出绿光的Tf-488 nm分子（一种会被细胞经内胞作用而运送至高基氏体的运输蛋白质）与活细胞作用30分钟后，发现Tf-488 (绿光) 会与标示高基氏体的Golgin-245 (红光) 讯号重叠，表示Tf-488 nm分子的确会被运送至高基氏体，由此可以得知内胞作用的存在。（因Tf-488 nm被激发后会发出绿光，所以我们改用会被激发出红光的Golgin-245来作为高基氏体的标示物）。

四、VSVG-GFP的外释作用。

我们利用VSVG-GFP（一种病毒醣蛋白质与绿色萤光蛋白质结合的分子）来观察此种蛋白质在细胞内的运输过程，实验结果显示绿色的萤光物质散佈在细胞膜及细胞间质中，由此可知VSVG-GFP在内质网合成并运送至高基氏体后，会再运送至细胞膜。

五、蛋白质运送的调节作用。

我们已知ARL1这种分子会调节蛋白质的运输作用，所以运用转染的方式让细胞同时大量表现ARL1突变株 (ARL1QL) 、VSVG-GFP (绿色)，观察在有ARL1QL存在时，VSVG-GFP将无法顺利地输送至细胞膜上，转而堆积在高基氏体中。